自动过柱机操作流程：规范步骤，提升分离效率​

　　自动过柱机作为化学实验中用于混合物分离纯化的自动化设备，能精准控制洗脱过程，大幅提高分离效率和纯度。掌握其规范操作流程，是确保实验成功的关键，以下详细介绍。​

　　一、操作前的准备工作​

　　首先要检查过柱机的整体状态。查看设备外观是否完好，各连接管路有无破损、堵塞或松动，确保输液泵、检测器、收集器等核心部件正常运行。接通电源，打开设备总开关，启动控制系统，观察各模块是否正常响应，显示屏是否清晰显示参数设置界面。​

　　其次是色谱柱的准备。根据待分离样品的性质选择合适规格的色谱柱，如硅胶柱、C18 柱等，并检查色谱柱是否完好，柱床是否平整。若为新柱，需按照说明书进行活化处理；若为旧柱，需确认其性能是否满足实验要求，必要时进行冲洗再生。将色谱柱固定在设备的柱架上，注意柱的方向，确保流动相入口和出口连接正确。​

　　然后进行流动相的配制与处理。根据分离方案准确配制所需的洗脱剂，混合均匀后进行过滤和脱气处理，去除其中的颗粒杂质和气泡，避免堵塞色谱柱或影响检测信号。将处理好的流动相分别装入对应的溶剂瓶中，贴上标签注明名称和浓度，并将溶剂瓶放置在设备的指定位置，连接好输液管路，确保管路浸没在流动相中。​

　　最后是样品的准备。将待分离样品溶解在合适的溶剂中，配制成一定浓度的样品溶液，经滤膜过滤后装入样品瓶，避免样品中的不溶物污染色谱柱。同时，根据样品性质和分离要求，预设洗脱程序，包括流动相比例、流速、梯度洗脱时间、检测波长等参数。​
 

　　二、具体操作步骤​

　　1、管路排气：在控制系统中选择 “排气” 功能，启动输液泵，让流动相依次流经各管路和色谱柱，排除管路中的空气。观察管路中是否有气泡，若有气泡需反复排气直至气泡消除。对于多通道系统，需分别对每个通道进行排气操作，确保所有管路充满流动相。​

　　2、样品上样：将装有样品溶液的样品瓶放入自动进样器的样品架中，在控制系统中设置进样体积、进样位置等参数。启动进样程序，自动进样器会精准吸取设定体积的样品溶液，注入色谱柱顶端，完成上样过程。上样时需确保样品全部进入色谱柱，避免残留或泄漏。​

　　3、启动洗脱与分离程序：确认所有参数设置无误后，在控制系统中启动洗脱程序。设备会按照预设的梯度方案自动调节各流动相的比例，控制输液泵以设定流速将流动相泵入色谱柱。同时，检测器开始工作，实时监测洗脱液的信号变化，并将数据传输至控制系统，在显示屏上绘制色谱图。​

　　4、自动收集馏分：根据检测器的信号或预设的时间区间，收集器会自动切换收集瓶，对目标组分进行收集。操作人员需密切关注色谱图的变化，判断各峰的出峰时间和纯度，必要时可手动调整收集参数，确保目标组分被完整收集，减少杂质混入。​

　　5、程序结束与停机：当所有组分洗脱完成后，设备会自动执行结束程序，停止输液泵和检测器工作。此时，在控制系统中选择 “冲洗” 功能，用纯溶剂冲洗色谱柱和管路，去除残留样品和杂质，保护色谱柱性能。冲洗完成后，关闭输液泵，将色谱柱从柱架上取下，妥善保存。​

　　三、操作后的清理与维护​

　　实验结束后，及时关闭过柱机的控制系统和总电源，将使用过的流动相溶剂瓶清理干净，剩余流动相按规定处理，不可随意倾倒。拆下各连接管路，用纯水或合适溶剂冲洗干净后晾干，放置在指定位置。​

　　对收集到的馏分进行标记和后续处理，如旋蒸浓缩、检测纯度等。清理收集器中的空瓶，清洁设备表面的污渍和液滴，保持设备整洁。同时，记录实验过程中的关键参数和分离结果，包括样品信息、色谱柱型号、流动相组成、洗脱程序、色谱图等，为后续实验提供参考。​

　　定期对自动过柱机进行维护保养，如清洁自动进样器的进样针、检查输液泵的密封性、校准检测器的灵敏度等，确保设备长期稳定运行，延长使用寿命。